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详析注射用水细菌内毒素分析方法确认方案

试验过程:应进行3次独立的平行试验。

1、 试验准备:玻璃器皿用自来水彻底洗净,再用纯化水反复冲洗三遍以上,控干后用锡箔纸包好后放入金属容器内,放置入电热鼓风干燥箱。将电热鼓风干燥箱调至250℃,待电热鼓风干燥箱温度升至设定的温度后开始计时,干烤至少半小时。达到规定时间后,关断电源,待电热鼓风干燥箱温度自然降至室温。玻璃器皿用锡箔纸包装,在不打开包装的情况下,可在两周内使用。否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。

2、 鲎试剂灵敏度复核:

详见鲎试剂灵敏度复核操作规程

3 、干扰实验:目的是检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素反应有无干扰作用。使用的供试品溶液应为未检验出内毒素切不超过所使用的鲎试剂的有效稀释倍数的溶液。

3.1 制备内毒素标准对照溶液

取细菌内毒素工作标准品一支,轻弹瓶壁,使粉末落入瓶底,然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕,用75%酒精棉球擦似乎后启开,启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。按照标准品说明书,加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物,用封口膜将瓶口封严,置漩涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释,制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶液,即2λ、λ、0.5λ、0.25λ(λ为所复核的鲎试剂对的标示灵敏度),每稀释一步均应在漩涡混合器上混合30秒钟。

3.2 制备含内毒素的供试品溶液:

根据公式MVD=cL/λ,确定注射用水的有效稀释倍数MVD=1,将注射用水稀释一倍后将细菌内毒素工作标准品稀释成4个浓度即为2λ、λ、0.5λ、0.25λ,即得含内毒素的供试品溶液。

3.3 鲎试剂的准备:

取规格为0.1ml/支的鲎试剂,用细菌内毒素检查用水溶解,在旋涡混合器上混匀15分钟,然后制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液,每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒。

7.6.3.4 合格标准:两λc在0.5λ-2.0λ范围内,且Et均在0.5Es-2.0Es范围内,说明该供试品浓度稀释至0.02mg/ml确已排除干扰作用,在低于或等于此浓度的情况下即可使用细菌内毒素检查法。

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